Saturday, 24 September 2016

Cloranfenicol 195






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La adición del antibiótico cloranfenicol al medio de cultivo bacteriano se puede utilizar para amplificar el número de copias de plásmidos. Cloranfenicol inhibe la síntesis de proteínas bacterianas y por lo tanto las bacterias replicación cromosómica . Debido a que el plásmido ( pMB1 o ColE1 ) replicón no requiere ningún proteínas recién sintetizadas para la replicación , continúa replicar en presencia del fármaco. 1. crecer un cultivo de una noche de 30 ml de células de bacterias transformadas en caldo LB más el antibiótico apropiado . 2. Utilizar 30 ml de este cultivo para inocular 500 ml de caldo LB . 3. Mantener el cultivo de 500 ml de exactamente 2,5 horas a 37 ° C 4. Añadir 2,5 ml de solución de cloranfenicol a una concentración final de aproximadamente 170 g / ml . 5. Incubar el cultivo de un 12 a 16 horas adicionales a 37ºC. 6. Las bacterias están ahora listas para la cosecha y purificación de plásmidos .




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